多聚甲醛固定(多聚甲醛如何固定肺组织)

大家好，本篇文章为大家解答以上问题，相信很多人对多聚甲醛固定都不是特别的了解，因此呢，今天就来为大家分享下关于多聚甲醛固定以及多聚甲醛如何固定肺组织的问题知识，还望可以帮助大家，解决大家的一些困惑，下面一起来看看吧！

本文目录一览

• 1、多聚甲醛固定组织一般固定多久
• 2、12孔板细胞多聚甲醛固定怎么操作

多聚甲醛固定组织一般固定多久

多聚甲醛固定组织一般固定1到2个小时。多聚甲醛通常用于生物医学领域的标本固定过程中，可以固定组织1到2个小时。固定时间的长短会因实验需求、标本类型、标本大小和形状等因素而有所不同。厚或较大的标本需要更长的固定时间，而较薄或较小的标本可以较短时间内完成固定。固定时间过短或过长都可能导致样本取得不理想的效果，因此，在标本固定前需要详细地了解研究需求，并认真设计实验方案选择合适的固定时间。

12孔板细胞多聚甲醛固定怎么操作

1、在培养板中培养好细胞后，吸除培养基，使用PBS轻洗细胞2×3min，做固定（凋亡的TUNEL染色等可以不清洗）。
2、固定：加入4%多聚甲醛(PBS配制)固定20分钟。如暂时不能立即做组化检测，使用含0.4%多聚甲醛的PBSPH7.4浸泡细胞（免疫组化检测完成前不要让细胞变干，否则细胞收缩形态不好）。
3、除去多聚甲醛，使用PBS轻洗细胞3×3min。
4、通透：0.5%TritonX-100(PBS配制)室温通透20min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）。
5、除去TritonX-100，使用PBS轻洗细胞3×3min。
6、内源性过氧化物酶处理：3%H2O2孵育15min（选做，必做二抗连HRP，其他的如做免疫荧光染色不用做）。
7、除去H2O2，使用PBS轻洗细胞3×3min。
8、封闭：用10%的与二抗同源的血清(PBS配制)封闭半小时。封闭结束后不要洗，直接上一抗。
9、一抗：滴加足够量适宜浓度的一抗，4℃孵育过夜（或37℃，60min）；若有两种一抗（要是不同种属的）则同时孵育，两种二抗亦同时孵育（二抗同时使用时最好是同一种属）。
10、除去一抗，使用PBS轻洗细胞3×3min。
11、二抗：滴加足够量适宜浓度的二抗，37℃，30min（从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行）。
12、除去二抗，使用PBS轻洗细胞3×3min。
13、二氨基联苯胺（DAB）底物显色：室温下避光孵育5至10分钟，或直至样本出现棕褐色（选作，二抗连得是酶的必做，显色时间严格控制，要避免显色过度引起假阳性；二抗连的是荧光素的不用做）。
14、除去显色工作液，使用PBS冲洗细胞3~4次。
15、复染核：0.5ug/mlDAPI（或200nMHoechst33342）避光孵育5min。
16、使用PBS轻洗细胞4×5min，洗去多余的DAPI。
17、取爬片时将注射器针头针尖向背面做个小钩，将爬片轻轻勾起，用小镊子取出。
18、用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，在荧光显微镜下观察并采集图像。
19、保存细胞爬片，在培养皿底放一层面巾纸，放爬片，便于实验取片。在盖子上做标记，在-20℃可保存2-3个月。